蛋白質(zhì)晶體板制作

設(shè)計并制作了一種在微腔中對蛋白質(zhì)進(jìn)行微批量法(microbatch)結(jié)晶的碟式微流控結(jié)晶芯片,它是一種高通量、低成本、低耗樣量(納升級)、操作簡便的蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選方法,這種芯片能成功地結(jié)晶溶菌酶(lysozyme)和青色熒光蛋白(CyPet).為了系統(tǒng)地比較這種微流控芯片與傳統(tǒng)的使用蒸汽擴(kuò)散法的24孔結(jié)晶板的結(jié)晶能力,用3個Hampton結(jié)晶試劑盒,在4℃及20℃培養(yǎng)條件下分別對5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白(溶菌酶(lysozyme)、木聚糖酶(xylanase)、脂肪酶B(lipase B)、葡萄糖異構(gòu)酶(glucose isomerase)和嗜熱菌蛋白酶(thermolysin))進(jìn)行了結(jié)晶篩選實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明,在4℃時微流控芯片與24孔結(jié)晶板有相近數(shù)目的結(jié)晶條件(91 vs 98)。

蛋白結(jié)晶板

獲取蛋白質(zhì)晶體是蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)解析,藥品生產(chǎn),自組裝納米體系構(gòu)建等過程中重要的步驟.例如,利用X射線衍射技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行三維結(jié)構(gòu)解析時,首先需要通過結(jié)晶條件篩選,獲得質(zhì)量較高的蛋白質(zhì)晶體,進(jìn)而進(jìn)行衍射得到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)信息.蛋白質(zhì)結(jié)晶需要經(jīng)歷從未飽和區(qū)經(jīng)亞穩(wěn)區(qū)至形核區(qū)的形核過程以及從形核區(qū)到亞穩(wěn)區(qū)的生長成熟過程.在整個蛋白質(zhì)結(jié)晶過程中,形核過程是至關(guān)重要的一步.均相形核過程中,結(jié)晶體系中各個部分形核概率相同,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)晶體系中溶液的過飽和度足夠克服形核勢壘時,在形核區(qū)發(fā)生成核,因而在低濃度的結(jié)晶溶液體系中,均相形核存在一定的局限性。

蛋白質(zhì)晶體板介紹

蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)，對蛋白質(zhì)晶體用X射線衍射法解出蛋白質(zhì)分子中各原子排列的三維結(jié)構(gòu)。在晶體中各蛋白質(zhì)分子以有序的晶胞形式重復(fù)排列，其形成受蛋白質(zhì)的純度和濃度、pH值、溫度、沉淀劑等影響。由于遺傳工程、同步輻射裝置、探測和分析技術(shù)、結(jié)晶自動化等技術(shù)的飛躍進(jìn)步，已獲得的蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)從初“蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫”

目前,仿生合成是制備純文石的有效方法之一,它是依據(jù)生物礦化原理,以有機(jī)物的組裝體為模板制備出具有的結(jié)構(gòu)及優(yōu)異的物理和化學(xué)性能的無機(jī)材料。本文利用生物礦化原理,在常溫常壓下以新型蛋白質(zhì),即竹蟶韌帶纖維狀蛋白質(zhì)層為基底,采用氣體擴(kuò)散法,通過氯化鈣溶液和二氧化碳反應(yīng)制備了納米文石晶體且具有梭狀,捆狀,球狀,花狀,狀和板片狀超結(jié)構(gòu)。