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Tris中文全稱三羥,CAS77-86-1,是重要的生物緩沖劑和酸量滴定法基準(zhǔn)物質(zhì),有著極其廣泛的社會(huì)使用性。三羥:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點(diǎn)時(shí)溫度效應(yīng)。這點(diǎn)往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris緩沖液,4℃時(shí)是8.4,37℃時(shí)是7.4,因此,4℃配制的緩沖液在37℃進(jìn)行測(cè)量時(shí),其氫離子濃度就增加了10倍。在pH7.5以下,其緩沖能力極為不理想。
水合氫離子的濃度取決于弱酸與其共軛堿的濃度比。當(dāng)加入少量強(qiáng)堿時(shí),酸被中和,導(dǎo)致了氫氧根離子在溶液中很少累積,從而的濃度增加,的濃度減少??梢钥吹?,雖然加入了強(qiáng)堿,但是溶液里的氫氧根離子變化很少,同時(shí),濃度較大,相對(duì)的變化小,兩者比值幾乎無(wú)變化,因此根據(jù)公式,水合氫離子的濃度變化很小。加入弱酸則是同樣的道理。由于在大濃度基數(shù)上的微小變化不會(huì)改變比值,也因此維持了體系內(nèi)氫離子和氫氧根離子濃度的平衡。
后,可以通過(guò)添加一些穩(wěn)定劑到蛋白純化緩沖液中,以幫助提高蛋白純化時(shí)的溶解度和穩(wěn)定性。在緩沖液中添加惰性蛋白BSA某種程度可以穩(wěn)定蛋白,但必須確保這些加入的穩(wěn)定蛋白不干擾實(shí)驗(yàn)。有時(shí)添加甘油、聚乙二醇等添加劑可以增加緩沖液粘度,有助于防止蛋白聚集。另外,使用少量的表面活性劑和一些離子化合物如硫酸鹽、氨基酸、檸檬酸等可以屏蔽蛋白間的離子相互作用,幫助蛋白溶解。