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如何提取胎牛血清白蛋白的!
一、所需材料,胎牛血清取近郊屠宰場,以檸檬酸三鈉為抗凝劑,血液采集后隨即分離出血漿備用。需要的試劑有血清白蛋白;xiu jia酚氯;醋酸纖維素薄膜,其余試劑均為分析純。提取胎牛血清白蛋白需要準(zhǔn)備 LG-6型大容量冷凍離心機(jī),DF-C型電泳儀,UV-754型紫外可見分光光度計,PHS-2型酸度計。
二、具體方法,白蛋白含量測定 采用xiu jia酚氯法,以胎牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn). 白蛋白純度的測定 采用醋酸纖維素薄膜電泳法。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質(zhì)溶液在波長為403 nm處的光吸收值,然后折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表示。
關(guān)于抗體的選擇
種屬特異性:同 種蛋白不同物種,有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉 反應(yīng)。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,可以通過蛋白的序列比對,選擇同源序列免yi 的抗體,不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受 理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,如果可以申請到免費的抗體樣品,則利于抗體選擇。
細(xì)胞培養(yǎng)小妙招
1、勤換水,水浴鍋很臟,細(xì)胞培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話,盤里的水也會很臟。那種公用的水浴鍋、培養(yǎng)箱,定期換水習(xí)慣不好的,交叉污染嚴(yán)重的,那就可以選擇一些綠色、安全、無刺激性的chu菌劑,改善一下,免得細(xì)胞遇到污染時措手不及。
2、勤擦洗,培養(yǎng)箱隔一段時間徹底用安全出菌劑擦洗一次,有人用酒精擦洗,但畢竟究竟只能除掉細(xì)菌,對于真菌是沒有辦法sha死的,所以這里推薦大家選用效果和口碑都不錯的chu菌劑處理。
3、勤清潔,細(xì)胞房日常的值日清潔是必須的,此外還要定期熏蒸。
如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)?
首先要注意正確的血清解凍步驟,而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加,使用中應(yīng)該盡量避免:(1)熱滅huo血清;(2)在 37℃下培養(yǎng)血清;(3)反復(fù)凍融;(4)γ射線照射;(5)長期儲存在 2-8℃;(6)在室溫下放置時間過長。
如何去除血清中的沉淀?
如想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝到無菌離心管中,以 400g 離心,上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因為這可能阻塞濾膜。