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PCR實驗室工作基本原則
實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。
PCR實驗室布局
不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開。
PCR實驗室各區(qū)功能及主要設備
擴增區(qū):主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設備有:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對(bp),對紫外線損傷不敏感,因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間,好是照射過夜。
PCR實驗室的設計原則
使用實時熒光PCR儀,擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并;
采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
PCR實驗室的設計原則
原則上應當設置4個區(qū)域:試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可適當合并。
PCR實驗室注意事項
試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)設緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求,可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇。
PCR實驗室各區(qū)功能及主要設備
樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。