PCR實(shí)驗(yàn)室是分子診斷的基礎(chǔ)，也是進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的必備場所。近些年，分子診斷行業(yè)快速發(fā)展，對PCR的認(rèn)識(shí)又進(jìn)入到了一個(gè)新的階段，但是基于實(shí)驗(yàn)室的基本知識(shí)仍然是非常重要的一環(huán)。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——標(biāo)本制備區(qū)

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。

PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則

1.進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行

試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。

實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動(dòng)紫外燈（254nm波長），在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上60～90cm內(nèi)照射。

核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

PCR實(shí)驗(yàn)室布局

實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動(dòng)。