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廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。廣州勱博--生豬屠宰場(chǎng)PCR熒光定量PCR最早稱TaqManPCR,后來(lái)也叫Real-TimePCR,是美國(guó)PE(PerkinElmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。
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一個(gè)豬場(chǎng)對(duì)進(jìn)場(chǎng)人員的衣物進(jìn)行熏蒸消毒,專門制作了一個(gè)消毒柜,但由于開(kāi)始設(shè)計(jì)不理想,消毒柜太大,無(wú)法進(jìn)入屋內(nèi),就放在了舍外。夏秋季節(jié)消毒沒(méi)什么問(wèn)題,但到了冬天,他們?nèi)匀辉谏嵬庋粝荆@樣的效果是很差的。還有的在入舍消毒池中,只是例行把水和火堿放進(jìn)去,也不攪拌,火堿靠自身溶解需要較長(zhǎng)時(shí)間,那剛放好的消毒水的作用就不確實(shí)了。(3)目前real-timeQ-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高,從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。
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現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明,在豬日糧中,豬流行性腹瀉病毒和其他外來(lái)病毒等能很好存活的原料包括:豆粕、酒糟、豬源蛋白質(zhì)、維生素預(yù)混料、氨化膽i堿、L-賴氨酸和DL-蛋氨酸。如果其他尚未被評(píng)估的原料符合以下標(biāo)準(zhǔn)就更有利于病毒存活:蛋白質(zhì)含量高(特別是天然蛋白質(zhì))、豬源、相對(duì)表面積較大質(zhì)量(比)、含有載體的微成分。值得注意的是,這些原料并非具有相同的污染風(fēng)險(xiǎn)?;蛘吒鶕?jù)實(shí)際情況,在生豬進(jìn)場(chǎng)前以生豬運(yùn)輸車輛為單位采集全部生豬血液樣品,混合后進(jìn)行檢測(cè)。
廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,該病也是我國(guó)防范的一類動(dòng)物疫情。
廣州勱博--養(yǎng)豬場(chǎng)熒光定量PCR
熒光定量PCR技術(shù)產(chǎn)生并成熟于上世紀(jì)90年代,由于該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,能夠?qū)CR反應(yīng)的全過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,并且自動(dòng)化程度高,所以該技術(shù)從產(chǎn)生到現(xiàn)在短短的十幾年時(shí)間,在科研及檢驗(yàn)領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的一項(xiàng)重要技術(shù)。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測(cè)及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)隨著PCR反應(yīng)的積累來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR反應(yīng)的進(jìn)程,并通過(guò)分析軟件對(duì)PCR的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)分析的技術(shù)。系統(tǒng)組成:定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。
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進(jìn)行熒光定量PCR體系的配制時(shí)i好在冰上進(jìn)行,操作環(huán)境不用非得在超凈臺(tái)中進(jìn)行,環(huán)境安靜整潔都可以。因?yàn)槊恳粋€(gè)梯度要做三個(gè)重復(fù),因此先在1ml的無(wú)菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。廣州勱博--養(yǎng)殖場(chǎng)核酸提取純化傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點(diǎn)PCR來(lái)對(duì)樣品中的模板量進(jìn)行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來(lái)檢測(cè)PCR反應(yīng)的最終擴(kuò)增產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)中我使用過(guò)熒光定量八聯(lián)管和96孔板,個(gè)人推薦96孔板。因?yàn)榘寺?lián)管你需要蓋上蓋子,而且蓋子比較的難按下去,稍不慎就把八聯(lián)管弄斷或者液體撒出來(lái)。有的時(shí)候一下忘記了是從哪邊開(kāi)始的。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。上機(jī)器前i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來(lái)同時(shí)也消掉氣泡。
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目前全世界都沒(méi)有有效的非洲i疫i苗進(jìn)行預(yù)防,現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對(duì)非洲病毒進(jìn)行檢測(cè),根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無(wú)害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。根據(jù)應(yīng)對(duì)流行性腹瀉病毒的經(jīng)驗(yàn),在不影響動(dòng)物性能和飼料成本的情況下,替換原料的可行性使得很多生產(chǎn)者不再使用豬源原料。農(nóng)i業(yè)部要求豬場(chǎng)、飼料廠和屠宰廠和流通環(huán)節(jié)必須進(jìn)行非洲病毒檢測(cè)。豬場(chǎng)、飼料廠、屠宰廠和流通環(huán)節(jié)用我們的ASFV LAMP現(xiàn)場(chǎng)可視化快速檢測(cè)試劑盒對(duì)非洲病毒進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無(wú)害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。從而對(duì)非洲進(jìn)行有效的防控。i大限度減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。
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PCR檢測(cè)同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設(shè)計(jì),該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測(cè)到已知所有22種p72病毒基因型的多個(gè)毒株。但在PCR反應(yīng)中,由于模板、試劑、焦磷酸鹽分子的聚集等因素影響聚合酶反應(yīng),最終導(dǎo)致PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式進(jìn)行而進(jìn)入“平臺(tái)期”,而且一些反應(yīng)的終產(chǎn)物比另一些要多,因此終點(diǎn)PCR反應(yīng)方法定量并不準(zhǔn)確。PCR檢測(cè)雖不需要熒光顯微設(shè)備,但也需要相關(guān)設(shè)備,可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速非瘟檢測(cè)技術(shù)。
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根據(jù)動(dòng)物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級(jí)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法向屠宰場(chǎng)派駐(出)官i方獸醫(yī)實(shí)施屠宰檢疫。如測(cè)定病i人樣本中病原體的含量、實(shí)驗(yàn)樣本中某一特定的mRNA的含量等。按照生豬屠宰檢疫規(guī)程和相關(guān)規(guī)定,屠宰檢疫內(nèi)容包括傳i染病和寄i生蟲(chóng)病,檢疫流程包括生豬進(jìn)入屠宰廠(場(chǎng)、點(diǎn))監(jiān)督查驗(yàn)、檢疫申報(bào)、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結(jié)果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫(yī)監(jiān)督屠宰企業(yè)開(kāi)展非洲自檢,對(duì)沒(méi)有開(kāi)展自檢的屠宰企業(yè),對(duì)屠宰后的生豬產(chǎn)品一律不得出具動(dòng)物檢疫證明。
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)擴(kuò)增曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。還有的在入舍消毒池中,只是例行把水和火堿放進(jìn)去,也不攪拌,火堿靠自身溶解需要較長(zhǎng)時(shí)間,那剛放好的消毒水的作用就不確實(shí)了。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測(cè)定、基因芯片結(jié)果驗(yàn)證、藥i效分析等。金開(kāi)瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針?lè)ㄟM(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),從引物設(shè)計(jì)到檢測(cè)一次性完成,提供2種常用的內(nèi)參引物及免費(fèi)的專業(yè)數(shù)據(jù)分析,每個(gè)樣品設(shè)置至少三個(gè)平行對(duì)照,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。