近年來(lái)，固相萃取小柱應(yīng)用得到快速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、制藥等行業(yè)，成為樣品前處理凈化的有效手段之一。2、上樣——將樣品（包括分離物和干擾物）用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分通過(guò)吸附劑，吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物?？墒牵脩粼谑褂霉滔噍腿⌒≈^(guò)程中也會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題。小析姐根據(jù)小伙伴們們多年的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的交流，現(xiàn)將使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題及解決辦法整理在一起，方便大家輕松應(yīng)對(duì)固相萃取常見(jiàn)問(wèn)題

植物油中9種抗1氧化劑檢測(cè)——SPE法

SPE凈化步驟

SPE柱：Welchrom?  PS/DVB          

規(guī)格: 500mg/6mL

活化：5mL 甲1醇 ，5mL 乙1腈平衡，棄去

上樣：待凈化液全部上樣，收集

洗脫：10mL 甲1醇：乙1腈 （1:2）洗脫，收集

濃縮：合并收集液于旋蒸瓶中，40°C 下旋干，并用乙1腈復(fù)溶，定容到 2mL，過(guò) 0.22μm 濾膜，上機(jī)

注意事項(xiàng)：

加標(biāo)過(guò)程：在1g油樣中精1確加入0.2mL 100μg/mL 9 種抗1氧化劑混標(biāo)，樣品加標(biāo)量為20mg/kg，上機(jī)濃度為 10μg/mL

液相色譜條件

色譜柱：月旭Ultimate? XB-C18，5μm，4.6×250mm

流動(dòng)相：A：0.5%甲酸水溶液；B：甲1醇

流速： 1mL/min

進(jìn)樣量：5μL

柱溫：35℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

廣州碩譜生物科技有限公司氧化鋁SPE柱價(jià)格

固相萃取柱廣泛應(yīng)用于食品、農(nóng)產(chǎn)品、環(huán)境、生物產(chǎn)品樣品的前處理，主要起到凈化、分離、濃縮作用。內(nèi)部的篩板和填料是關(guān)鍵，外形類(lèi)似注射1器。如果樣品基質(zhì)中同時(shí)含有大量的非極性干擾雜質(zhì)，就應(yīng)該避免采用非極性的萃取機(jī)理，而將樣品的pH調(diào)節(jié)到低于其pKa兩個(gè)pH單位，即pH=2。相信每個(gè)人都會(huì)疑惑，為什么我的實(shí)驗(yàn)回收率不高？明明前處理并不麻煩，只是過(guò)一小柱啊，為什么回收率會(huì)低呢？那么問(wèn)題來(lái)了，是不是應(yīng)該用固相萃取柱呢？包裝、規(guī)格、型號(hào)是否受到關(guān)注？

簡(jiǎn)單明了地介紹一下，什么是固相小柱。

固相萃取小柱是一種用途廣泛而且越來(lái)越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。大多數(shù)用來(lái)處理液體樣品。萃取、濃縮和凈化其中的半揮發(fā)性和不揮發(fā)性化合物；也可用于固體樣品，但必須先把固體樣品處理成液體。

對(duì)于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測(cè)定分子量比較高的多肽，尤其重要。國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料，一般買(mǎi)國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱，買(mǎi)到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長(zhǎng)。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。

近二十年來(lái)，固相萃取已逐步發(fā)展成為一種有效的分離和純化手段，在藥品純化、精細(xì)化學(xué)品制備、影像分析、環(huán)境分析、生命科學(xué)等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。

固萃取又稱固相萃取，液固萃取。分離技術(shù)結(jié)合了選擇性保留和選擇性洗脫等工藝過(guò)程。該方法主要應(yīng)用于樣品的分離提純濃縮，與傳統(tǒng)的液萃取法相比，可提高分析物的回收率，有效分離，減少預(yù)處理過(guò)程，操作簡(jiǎn)便，節(jié)省時(shí)間和人力。

近幾年來(lái)，小柱固相萃取技術(shù)發(fā)展迅速，已在食品、環(huán)境、醫(yī)i藥等行業(yè)得到廣泛應(yīng)用，成為樣品前處理和凈化的有效手段之一。然而，用戶在使用固相萃取柱時(shí)也會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題。

依據(jù)多年的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)將使用過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法整理，方便大家應(yīng)付固相萃取的常見(jiàn)問(wèn)題。

固相萃取操作中常見(jiàn)的問(wèn)題如下：

回收率低

當(dāng)一個(gè)完整的 SPE操作過(guò)程中，目標(biāo)化合物可能存在于出樣溶液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物不能回收或回收率低”現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)，可以向樣品溶液中加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整 SPE操作，分別收集出樣液、淋洗液和洗脫液進(jìn)行分析，首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，然后確定問(wèn)題來(lái)自以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：

1.目標(biāo)化合物對(duì)吸附劑的保持力不足；

2.目標(biāo)化合物未完全洗除；

3.其它環(huán)節(jié)。

正相作用機(jī)理

常見(jiàn)的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有氰基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強(qiáng)度也逐漸增大。反之，如果樣品中同時(shí)含有大量的陽(yáng)離子干擾雜質(zhì)，則應(yīng)該調(diào)節(jié)樣品的pH至6。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)物。

上樣

由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性，篩板孔徑在 20um，在上樣之前需要把顆粒物給過(guò)濾掉，比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機(jī)i溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉；對(duì)于一般的基質(zhì)，應(yīng)采用過(guò)濾，離心或者高速離心，換大孔徑填料等方式進(jìn)行處理，現(xiàn)在好多第三方檢測(cè)單位樣品量非常多，但是該做的前處理步驟不能省，否則對(duì)儀器的損壞，對(duì)數(shù)據(jù)的可靠性都會(huì)有一定的影響。SPE也是一個(gè)柱色譜分離過(guò)程，分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方面與高1效液相色譜（HPLC）有許多相似之處。