ELISA試劑盒的操作方法——間接法

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1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

4.（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.然后用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。

Elisa試劑盒原理及用途

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)肌肉組織、牛奶等樣品中的米松（Dexamethasone，DEX），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的米松藥品和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗米松藥類(lèi)，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。

Elisa試劑盒技術(shù)原理

(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。

(2). 結(jié)合在固相載體表面a的抗原或仍保持其活性。

(3). 酶標(biāo)記的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。

(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

(5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測(cè)定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的有效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。