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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;與細(xì)胞RNA的雜交可分析任何一種RNA在細(xì)胞中和組織中的分布??梢蚤_展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),以防液體蒸發(fā)。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;陽性對照用已知含靶序列的組織切片與待檢標(biāo)本同樣處理,結(jié)果應(yīng)為陽性,稱陽性對照??梢蚤_展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)結(jié)合的新技術(shù),是以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法熒光原位雜交技術(shù)問世于20世紀(jì)70年代后期。1977年,熒光標(biāo)記的被應(yīng)用于識別特異性DNA—RNA雜交I I。1980年,J.G.Baunlan等將應(yīng)用化學(xué)偶聯(lián)的方法將熒光素結(jié)合到RNA探針上用于直接快速的特異性靶序列檢測。熒光原位雜交技術(shù)技術(shù)原理是將熒光素直接或間接標(biāo)記的核酸探針[或生物素、、dinit rophenyl(I)NP)、aminoacetylAAFfluorine(AAF)等標(biāo)記的核酸探針與待測樣本中的核酸序列按照堿基互補配對的原則進(jìn)行雜交,經(jīng)洗滌后直接在熒光顯微鏡下觀察。原位雜交技術(shù)因其高度的靈敏性和準(zhǔn)確性而日益受到許多科研工作者的歡迎,并廣泛應(yīng)用到基因定位、和基因圖譜的構(gòu)建等研究領(lǐng)域。
熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非性原位雜交技術(shù),原理是利用報告分子(如生物素、等)標(biāo)記核酸探針,然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交,若兩者同源互補,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。此時可利用該報告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的化學(xué)反應(yīng),經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。 [1]
原位雜交對照試驗
同組織化學(xué)染色對照一樣,為證明原位雜交實驗操作的準(zhǔn)確性和實驗結(jié)果的特異性,需要設(shè)置一系列對照實驗,具體的各種對照實驗的設(shè)置及其意義請參考原位雜交專著,以下僅介紹幾種常用的對照實驗。