安裝好電極。在滅菌前檢查各接口，各個管線外觀是否是正常的，出蒸汽管是否是牢固的。各個閥門應(yīng)由兩個人去檢查是否處于完全關(guān)閉狀態(tài)。

滅菌

    滅菌時至少要求兩個人在場，一個人來負責(zé)操作各種閥門，另一個人來負責(zé)觀察報告各項參數(shù)。

確認各個閥門處于關(guān)閉狀態(tài)后，打開蒸汽發(fā)生器進水閥，啟動蒸氣發(fā)生器，蒸氣發(fā)生器開始自動進水，此時應(yīng)該打開蒸氣發(fā)生器下部的排水閥，盡量放去水銹后關(guān)閉排水閥。注意觀察蒸汽發(fā)生器內(nèi)水量液位，防止發(fā)生事故。

   此時應(yīng)完全打開夾套出氣閥閥門，緩慢打開蒸汽發(fā)生器的總閥門，緩慢打開部分夾套進氣閥，開始對夾套通入水蒸 氣。開始時可能蒸汽壓力不穩(wěn)，壓力表指針劇烈擺動，可以適當(dāng)關(guān)小夾套進氣閥，然后依次來打開取樣閥出蒸汽閥，取樣閥進蒸汽閥，底閥出蒸汽閥，底閥進蒸汽 閥，對取樣閥和底閥滅菌，同時排盡壓力不穩(wěn)的水蒸氣。水蒸氣壓力不劇烈變化時再依次關(guān)閉、底閥出氣閥。在微生物發(fā)酵過程中,溶解氧濃度與其它過程參數(shù)的關(guān)系極為復(fù)雜,受到生物反應(yīng)器中多種物理、化學(xué)和微生物因素的影響和制約。

溶氧在發(fā)酵工程中的重要性

發(fā)酵液中的溶氧濃度（Dissolved Oxygen ，簡稱DO）對微生物的生長和產(chǎn)物形成有著重要的影響。在發(fā)酵過程中，必須供給適量的無菌空氣，菌體才能繁殖和積累所需代謝產(chǎn)物。發(fā)酵過程中，氧的傳質(zhì)速率主要受發(fā)酵液中溶解氧的濃度和傳遞阻力 影響。研究溶氧對發(fā)酵的影響及控制對提高生產(chǎn)效率，改善產(chǎn)品質(zhì)量等都有重要意義。這種形式死角少，清洗、維修方便，冷卻較均勻，但必須添加泵來完成。

一、溶氧對發(fā)酵影響

溶解氧對發(fā)酵的影響分為兩方面：一是溶氧濃度影響與呼吸鏈有關(guān)的能量代謝，從而影響微生物生長；另一是氧直接參與產(chǎn)物合成。

（一）溶氧對微生物自身生長的影響

專性好氧微生物把氧作為終電子受體，通過有氧呼吸獲取能量，如霉菌；進行 此類微生物發(fā)酵時一般應(yīng)盡可能的提高溶解氧(DO)，以促進微生物生長，增大菌體量。兼性好氧微生物的生長不一定需要氧，但如果在培養(yǎng)中供給氧，則菌體生 長更好，如酵母菌；例如，達到混合功能需要大直徑的攪拌器和采用低轉(zhuǎn)速運轉(zhuǎn)，而提高分散氣泡效果則需要多葉片、小直徑和大的轉(zhuǎn)速。典型如乙醇發(fā)酵，對溶DO的控制分兩個階段，初始提供高DO值進行菌體擴大培養(yǎng)，后期嚴格控制DO進行厭氧發(fā)酵。厭氧和微好氧微生物能 耐受壞境中的氧，但它們的生長并不需要氧，這些微生物在發(fā)酵生產(chǎn)中應(yīng)用較少。

因為氧氣 的存在會促使酵母采取有氧呼吸的代謝途徑,從而破壞乙醇發(fā)酵的厭氧代謝過程。但是,研究表明無氧條件下發(fā)酵生成的乙醇低于溶氧控制在1%-4%條件下生成 的乙醇。這主要是由于無氧條件下的菌體量遠遠低于有氧條件下菌體量,而乙醇的生成與菌體量有很大的聯(lián)系。研究溶氧對發(fā)酵的影響及控制對提高生產(chǎn)效率，改善產(chǎn)品質(zhì)量等都有重要意義。

類似微生物發(fā)酵的活性污泥法處理污水的過 程中，DO的影響及控制也十分重要。曝氣池中氧氣不足和過量都會對微生物生存環(huán)境帶來不利影響.當(dāng)氧氣不足時,一方面由于曝氣池中絲狀菌會大量繁殖,終 產(chǎn)生污泥膨脹;另一方面會降低細1菌分解的效果,延長處理時間,甚至導(dǎo)致生物處理失效.而氧氣過量(即過量曝氣)則會由于絮凝劑遭到破壞而導(dǎo)致懸浮固體沉降 性變差,同時使能耗過高。種子罐廠家說明罐體滅菌前務(wù)必檢查其中液面高度，要求所有的電極都沒于液面以下。

發(fā)酵罐罐體的清洗維護和保養(yǎng)

發(fā)酵罐罐體是直接與物料接觸的場所。其表面光潔度的程度以及內(nèi)部構(gòu)件的清潔度是直接影響染菌的處于因素。因此，在每次發(fā)酵結(jié)束后和再次使用前都必須及時清洗罐體及相關(guān)設(shè)備，清洗時應(yīng)注意電器元件、電 極接口，不能進水，受潮。 清洗前應(yīng)取出PH、DO電極按其要求保養(yǎng)。8在各操作過程中，必須保持空氣管道中的壓力大于發(fā)酵罐的罐壓，否則會引起發(fā)酵罐中的液體倒流進入過濾器中，堵塞過濾器濾芯或使過濾器失效。

  清洗罐內(nèi)可配合進水進氣、電機攪拌、加溫一起進行，如多次換水還不能清洗潔凈，則要打開頂蓋用軟毛刷刷洗罐內(nèi)部件。方法如下：控制開關(guān)與電源開關(guān)，取下頂 蓋電極、電機及其連線插頭。拔下進氣膠管冷凝器快速接頭拆下進氣過濾器上膠管與接頭；滅菌過程中如果蒸汽發(fā)生器自動進水，蒸汽總壓將迅速下降，必要時可以適當(dāng)開大蒸汽總閥門，保持壓力，但要小心觀察壓力變化。把頂蓋連同攪拌一起垂直向上拆卸下來，并橫置于平整桌面，墊好、不要 碰撞軸和葉輪，用中性洗滌劑刷洗罐體及內(nèi)部各部件。

  用酒精棉火焰將接種閥灼燒，在火焰保護下接入滅好菌的三角瓶內(nèi)或試管中，塞上棉塞，放入接種室。

接種。接種室安常規(guī)方法消毒后，打開接種機，點燃酒精燈，在酒精燈火焰保護下將取樣的液體用接種鉤取菌球或菌液接入試管斜面培養(yǎng)基上，塞上棉塞。

如果沒有制作或不具備試管斜面培養(yǎng)基，可以用滅好菌的栽培袋或瓶，按前法在接種閥處直接取樣接入袋或瓶，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。

培養(yǎng)。放入培養(yǎng)室或恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，溫度為28℃--32℃。

觀察。將培養(yǎng)24h--36h之間的液體前后觀察兩次，如菌球萌發(fā)變潔白，接種面無紅、黃、綠、黑色雜菌，證明液體生長正常，液體生長成熟，然后即可使用接種；否則，說明液體已污染雜菌

總結(jié)

通過此法檢驗，可以在早期及時準確地判斷出掌握液體培養(yǎng)狀態(tài)，避免盲目接種到大批量栽培袋或瓶中，對指導(dǎo)液體的生產(chǎn)應(yīng)用起到了保障作用。