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在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過(guò)程中要考慮使用環(huán)境。且來(lái)看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。因?yàn)門(mén)ris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。需要注意的是THAM緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,而且易吸收CO2所以需要密封。THAM主要就是用于生物緩沖劑的,與用于的緩血酸胺有差異,需要加以區(qū)別。
使用緩沖溶液的注意事項(xiàng):不少緩沖溶液都含有易揮發(fā)組分,如,氨-氯化銨中的氨酷酸-中的醋酸?,F(xiàn)在,不少實(shí)驗(yàn)室引入了定量加液器,用定量加液器加試劑,具有簡(jiǎn)便準(zhǔn)確誤差恒定的特點(diǎn),特別是在做成批樣品時(shí)更顯出它的優(yōu)越性,不少同志也喜歡用它來(lái)加緩沖液,但是,應(yīng)注意緩沖液不能長(zhǎng)久存放在定量加液器中,因該器皿不密閉,易造成氨的揮發(fā)(醋酸-緩沖液中的醋酸也同理),從而,導(dǎo)致溶液失效,正確的做法是緩沖液應(yīng)適量配制,使用后及時(shí)密閉并置于低溫中保存。
常用貯液與溶液
1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾。
10mg/ml牛蛋白(BSA):加100mg的牛蛋白(組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí),無(wú)DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,
須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直至牛蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃?;蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇
至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。