脂質(zhì)體法

　　是用帶正電荷的脂質(zhì)體作載體攜帶外源基因，與帶負電荷的細胞膜融合，把外源基因?qū)爰毎Ｓ弥|(zhì)體法轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，其毒性較電1擊法和PEG法小，且適于運輸大分子DNA穿過質(zhì)膜。

　　Antonelli等（1990）用該法將基因組DNA轉(zhuǎn)入BMS玉米原生質(zhì)體，獲得轉(zhuǎn)化了的再生愈傷組織，轉(zhuǎn)化率高達8%。

　　脂質(zhì)體法的優(yōu)點是轉(zhuǎn)化受體為單個細胞，易于篩選，不易形成嵌合體，對于原生質(zhì)體再生能力好的植物品種，是非常好的轉(zhuǎn)化方法。

真核細胞同源重組法

1994 年，Graham F建立了在293細胞同源重組產(chǎn)生重組腺病毒的方法。這個方法需要2個質(zhì)粒：骨架質(zhì)粒含有腺病毒絕大部分基因組序列，但不含有包裝信號；穿梭質(zhì)粒含有ITR、包裝信號和目的基因克1隆位點，以及兩段與骨架質(zhì)粒有重疊的序列。將目的基因克1隆到穿梭質(zhì)粒，與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞，由于這兩個質(zhì)粒的部分序列有重疊，能夠在細胞內(nèi)發(fā)生同源重組，zui終產(chǎn)生完整的載體基因組，并包裝出重組病毒顆粒。該方法曾經(jīng)被廣泛使用，推動了腺病毒載體的發(fā)展。由于細胞內(nèi)重組效率低，某些重組事件還可能產(chǎn)生可copy病毒(RCV)，必需經(jīng)過噬斑純化才能獲得正確的克1隆化的重組病毒，費時費力，正逐漸被其他方法替代。

腺病毒傳播特點

宿主范圍廣對人致病性低，腺病毒載體系統(tǒng)可廣泛用于人類及非人類蛋白的表達。腺病毒可感1染一系列哺乳動物細胞，因此在大多哺乳動物細胞和組織中均可用來表達重組蛋白。特別需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮細胞性，而人類的大多數(shù)的腫1瘤就是上皮細胞來源的。另外，腺病毒的copy基因和致病基因均已相當(dāng)清楚，在人群中早已流行（70-80%成人體內(nèi)都有腺病毒的中和抗1體存在）。人類感1野1生型腺病毒后僅產(chǎn)生輕微的自限性癥狀，且病毒唑cure有效。