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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制??梢蚤_展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
與其他原位雜交技術(shù)相比,熒光原位雜交具有很多優(yōu)點(diǎn),主要體現(xiàn)在:①FISH不需要性同位素標(biāo)記,更經(jīng)濟(jì)安全。②FISH的實(shí)驗(yàn)周期短,探針穩(wěn)定性高,特異性好,定位準(zhǔn)確,能迅速得到結(jié)果。③FISH通過多次化學(xué)反應(yīng),使雜交信號增強(qiáng),靈敏度提高,其靈敏度與性探針相當(dāng)。④多色FISH通過在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可同時(shí)檢測多種序列。⑤既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化。原位雜交是指用特定探針定位、檢測DNA、RNA的一種有效的實(shí)驗(yàn)方法,通過把特點(diǎn)序列到特殊載體上,通過轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)一條天然的RNA探針,將探針和切片樣品進(jìn)行雜交,通過一系列顯色方法,來確定RNA或者DNA表達(dá)區(qū)域。也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。 [1]
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火溫度下復(fù)性??梢蚤_展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。雜交與顯色
雜交將已標(biāo)記的探針加入預(yù)雜交液即成為雜交液(探針濃度為1μg/m1),切片經(jīng)2×SSC短暫浸洗后,滴加雜交液,于濕盒內(nèi)置37℃或42℃孵育過夜。然后依次經(jīng)2×SSC室溫浸洗1h,l×SSC室溫浸洗lh,0.5×SSC 37℃浸洗30min,0.5×SSC室溫浸洗30min。注意滴加雜交液時(shí)切片勿干燥。1molPBS洗三次,2×SSC洗10min,滴加預(yù)雜交液室溫孵育1h。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
陰性對照用已知不存在相應(yīng)靶序列的組織標(biāo)本雜交,結(jié)果應(yīng)為陰性。進(jìn)而詳細(xì)分析了熒光原位雜交探針市場競爭格局及熒光原位雜交探針行業(yè)標(biāo)桿企業(yè),后對熒光原位雜交探針行業(yè)發(fā)展前景作出預(yù)測,給出針對熒光原位雜交探針行業(yè)發(fā)展的建議和策略。陰性對照可排除在雜交過程中由于非特異性雜交反應(yīng)等因素造成的假陽性結(jié)果。
陽性對照用已知含靶序列的組織切片與待檢標(biāo)本同樣處理,結(jié)果應(yīng)為陽性,稱陽性對照。通過陽性對照可證明雜交過程中各個(gè)步驟以及所使用的試劑都合乎標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)方法可靠。熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非性原位雜交技術(shù),原理是利用報(bào)告分子(如生物素、等)標(biāo)記核酸探針,然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交,若兩者同源互補(bǔ),即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。尤其當(dāng)待檢標(biāo)本為陰性時(shí),陽性對照片呈陽性反應(yīng)可排除待檢標(biāo)本假陰性的可能。故若預(yù)期雜交結(jié)果為陰性時(shí),就必須設(shè)陽性對照,當(dāng)陽性對照亦不顯色,就證明雜交過程的某一步驟或所用試劑問題。