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酶是一種生物蛋白質(zhì),目前常用的酶分離方法存在的問(wèn)題是酶在分離后很容易失活,影響到它的催化活性。用磁性微球分離酶可以很好地保持它的活性和穩(wěn)定性,同時(shí)也使得體系中酶的回收更加方便,提高了酶的使用效率。
分析:將磁性微球表面包被特異性,就可以和待測(cè)樣品中抗原發(fā)生反應(yīng),用磁鐵就可以將微球和樣品基質(zhì)分離,然后將吸附和抗原的磁性微球用熒光檢測(cè)法或電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法檢測(cè)。該過(guò)程使分離與富集結(jié)合為一體,提高了分析檢測(cè)的靈敏度,同時(shí)避免了分析過(guò)程對(duì)人的可能危害。
核酸是現(xiàn)代生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究中的重要課題。核酸作為遺傳信息的攜帶者,是基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ),除了在生物體正常的生長(zhǎng)、發(fā)育、和繁殖等生命活動(dòng)中具有十分重要的作用外,它與生命的異常情況,如發(fā)生、損傷、遺傳疾病等也有密切關(guān)系。因此核酸是現(xiàn)代生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究中的重要課題。無(wú)論是進(jìn)行核酸結(jié)構(gòu)與功能的研究,還是進(jìn)行基因工程、蛋白質(zhì)工程,首先需要對(duì)核酸進(jìn)行分離純化。
超順磁性磁性微球是細(xì)胞分離、鑒定,基因分析,細(xì)菌和病毒的病原體診斷,核酸分離分析,蛋白質(zhì)純化的一個(gè)有效手段。通過(guò)寡聚核苷酸[Oligo(dT)]序列或鏈霉親和素等將DNA和RNA連接磁性微球表面已開(kāi)發(fā)了許多應(yīng)用。
磁性微球用于細(xì)胞分離需要考慮以下幾個(gè)因素;不與非特定細(xì)胞結(jié)合、具有靈敏的磁響應(yīng)性、在細(xì)胞分離介質(zhì)中不凝結(jié)。Jhunu等人用外源凝結(jié)素分別修飾聚苯乙烯磁性微球和白蛋白磁性微球,通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩者都有分離紅細(xì)胞的能力,白蛋白磁性微球效率比聚苯乙烯磁性微球的得多,但是成本高。Wedemeyer N等人則將高分子磁性微球結(jié)合不同的DNA而可以達(dá)到經(jīng)濟(jì)快速分離各種不同的細(xì)胞的目的。
利用磁流體或超順磁性物質(zhì)標(biāo)記細(xì)胞已是體內(nèi)細(xì)胞分離中日趨普遍的方法。多流體或超順磁性物質(zhì)標(biāo)記細(xì)胞已是體內(nèi)細(xì)胞分離中日趨普遍的方法。多數(shù)當(dāng)前用的標(biāo)記技術(shù)主要包括以下兩種方法:將磁性微球連接到細(xì)胞表面;通過(guò)液相內(nèi)吞、受體調(diào)解內(nèi)吞或噬菌作用使生物相容性磁性微球內(nèi)在化。
加熱固化法系指利用蛋白質(zhì)受熱凝固的性質(zhì),在100~180℃的條件下加熱使乳劑的內(nèi)向固化、分離制備微球的方法。常用的載體材料為白蛋白,必須是水溶性的。常將與25%白蛋白水溶液混合.加到含適量乳化劑的油相(如棉籽油)中,制成油包水的初乳,另取適量油加熱至100-180℃.控制攪拌速度將初乳加入熱油中,約維持20分鐘,使白蛋白乳滴固化成球,用適宜溶劑洗滌除去附著的油,過(guò)濾、干燥即得。