色譜又稱色層法或?qū)游龇?，是一種物理化學(xué)分析方法，它利用不同溶質(zhì)（樣品）與固定相和流動(dòng)相之間的作用力（分配、吸附、離子交換等）的差別，當(dāng)兩相做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，各溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次平衡，使各溶質(zhì)達(dá)到相互分離。1906年Tswett 研究植物色素分離時(shí)提出色譜法概念；如果長時(shí)間不用，這一段管路的液體會(huì)徹底干掉，而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細(xì)看是分辨不出來的。他在研究植物葉的色素成分時(shí)，將植色譜物葉子的萃取物倒入填有碳酸鈣的直立玻璃管內(nèi)，然后加入使其自由流下，結(jié)果色素中各組分互相分離形成各種不同顏色的譜帶。按光譜的命名方式，這種方法因此得名為色譜法。以后此法逐漸應(yīng)用于無色物質(zhì)的分離，“色譜”二字雖已失去原來的含義，但仍被人們沿用至今。在色譜法中，靜止不動(dòng)的一相（固體或液體）稱為固定相（stationary phase） ；運(yùn)動(dòng)的一相（一般是氣體或液體）稱為流動(dòng)相（mobile phase）。

如果流路管中真漏氣了怎么辦？

建議是用外力使管路中充滿液體。

具體如下：

1、找到流路管進(jìn)入輸送泵的接頭。

2、擰下來。

3、用一干凈洗耳球的尖1端對(duì)準(zhǔn)管路的平整切口。

4、吸液體，看液面從流動(dòng)相瓶里上升，至離洗耳球5cm左右時(shí)停止該動(dòng)作。

5、快速把接頭擰回輸送泵上（這個(gè)過程可能會(huì)有少許流動(dòng)相外泄，這是正?，F(xiàn)象）。

6、開機(jī)，開排液閥門，啟動(dòng)輸送泵。

7、等排液管中流出的溶液沒有氣泡時(shí)，再關(guān)閉排液閥，儀器正常工作。

輸送泵和柱子：這些部分進(jìn)了氣泡一般不怕，沖掉就行。

塞桿 現(xiàn)象：液相色譜儀無流動(dòng)相流出，壓力波動(dòng)，更換新的墊圈后仍滲漏。原因：一旦出現(xiàn)以上現(xiàn)象，只有更換柱塞桿。更換進(jìn)要用專用工具，由于此項(xiàng)操作比較復(fù)雜困難，故需請(qǐng)專業(yè)維修工程師來解決。也可自行按說明書的指導(dǎo)仔細(xì)進(jìn)行。     

進(jìn)樣系統(tǒng)     液相色譜儀當(dāng)測量樣品的面積，峰高數(shù)據(jù)不重復(fù)時(shí)，則要考慮進(jìn)樣系統(tǒng)的問題。手動(dòng)進(jìn)樣器 首先檢查手動(dòng)進(jìn)樣器是否有滲漏，一般是由于污染使轉(zhuǎn)子磨損或用尖頭的針扎進(jìn)手動(dòng)進(jìn)樣器，劃傷了轉(zhuǎn)子。因此在定期清洗進(jìn)樣器，使用緩沖液后，要用水進(jìn)行充分的沖洗，以防沉積結(jié)晶鹽，磨損轉(zhuǎn)子。如確定轉(zhuǎn)子已磨損，則要更換轉(zhuǎn)子。若有進(jìn)樣器管路部分阻塞，可分段檢查，將阻塞的管路拆下，反裝在泵出口處進(jìn)行反沖。     ②自動(dòng)進(jìn)樣品 A、針密封墊損壞。此時(shí)出現(xiàn)滲漏。解決的辦法是將自動(dòng)進(jìn)樣器順序設(shè)定在維修位置。取下密封墊，更換一新的后將針復(fù)位。B、針污染。取下針，放在內(nèi)進(jìn)行超聲清洗，或更換新針。C、定量環(huán)污染。薄層色譜是在玻璃板上涂以固定相涂層，然后點(diǎn)樣，下端浸入溶劑，同樣自下而上分離。取下定量環(huán)反裝在泵的出口，以為流動(dòng)相用大流速進(jìn)行反沖。也可更換新的定量環(huán)。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(常有幾個(gè)小時(shí))。液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。也稱現(xiàn)代液相色譜。檢測器：應(yīng)該說，整個(gè)流路中只要有一個(gè)氣泡都會(huì)在檢測器上得到強(qiáng)烈的信號(hào)反映，檢測器內(nèi)部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。

HPLC的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)

HPLC有以下特點(diǎn)：

高壓—壓力可達(dá)150~300Kg/cm2。色譜柱每米為75 Kg/cm2以上。

高速—流速為0.1~10.0 ml/min。

—可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。

高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。