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試劑盒
自PCR技術(shù)誕生以來已經(jīng)有三十年了。從經(jīng)典PCR、實時定量PCR再到現(xiàn)在的數(shù)字PCR,這一技術(shù)在不斷蛻
變卻從未淡出我們的視野。近年來,等溫擴增技術(shù)的興起無疑是對PCR的巨大挑戰(zhàn)。
等溫擴增技術(shù)的基因快速診斷方法,涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域,具體是用體外生物檢測試劑快速檢測病原微
生物的一種技術(shù)。
包括如下步驟:一、對被檢樣品進行預(yù)處理;二、包括目標(biāo)靶基因數(shù)據(jù)庫的建立;生物信息學(xué)的分析比較;
基因組多態(tài)性的分型處理和簡并堿基的運用,獲得各種靶基因的特異性引物兩對,分別與靶基因中的六個
獨立區(qū)域序列特異性匹配;三、進行等溫擴增反應(yīng);四、分析判斷結(jié)果。該方法的優(yōu)點:不需特殊試劑與
設(shè)備;高特異性;.靈敏度高;鑒定簡便;用途廣: 可用于食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域的質(zhì)量控制和環(huán)境、
水質(zhì)等監(jiān)測;用于醫(yī)學(xué)臨床診斷,用于代謝性疾病和遺傳疾病的基因診斷。
等溫核酸試劑盒
RPA反應(yīng)的適宜溫度在37℃~42℃之間,無需變性,常溫下即可反應(yīng),大大加快了PCR的速度。并且由于不需要溫控設(shè)備,RPA可以真正實現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。RPA檢測的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂?/span>(尤其是DNA)模板擴增到可檢出水平,從單個模板分子得到大約1012擴增產(chǎn)物。無需復(fù)雜樣品處理,即可實地檢測;既可擴增DNA也可擴增RNA,省去額外的cDNA合成步驟;檢測方式多樣:終點檢測、對擴增過程進行實時監(jiān)控或通過側(cè)流層析試紙條(LFD)讀取結(jié)果。
試劑盒包括兩類:①.TwistAmp凍干研發(fā)試劑盒(包括TwistAmp Basic試劑盒、TwistAmp exo 試劑盒和TwistAmp nfo 試劑盒共三種);②. TwistAmp液態(tài)研發(fā)試劑盒(包括TwistAmp Liquid Basic 試劑盒和TwistAmp Liquid exo 試劑盒共兩種)
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“一般來說,核酸檢測是目前準(zhǔn)確的診斷方法?!庇腥烁嬖V記者,核酸檢測試劑盒出現(xiàn)假陰性,即沒有發(fā)現(xiàn)隱藏的病毒,可能與兩個方面有關(guān)。一是樣品沒有采集到。這一點很容易理解。例如,咽拭子采樣時人比較難受,深度不夠可能會采集不到含有病毒的樣本。但這樣的情況應(yīng)該很少發(fā)生。
另一個假陰性的原因是核酸檢測試劑盒的探針和引物質(zhì)量有波動,特別是定量的不造成檢測的不準(zhǔn)確。換句話說,由于這一次各家核酸檢測試劑盒供應(yīng)商都是臨時啟動,有些準(zhǔn)備不足,或是執(zhí)行規(guī)定步驟不到位,導(dǎo)致在生產(chǎn)過程中不進行定位,或是酶活性不足,或是酶中含有抑制酶鏈反應(yīng)的重金屬離子等,都可能造成檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰性。