廣州碩譜生物科技有限公司氨丙基SPE柱批發(fā)

SPE小柱的應用原理

固相萃取(SPE)技術是隨著樣品預處理要求的逐漸提高而被廣泛應用的。?回收率低在一次完整的SPE操作中，目標化合物可能會存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當“目標物沒有回收或回收率低”現象發(fā)生時，可向樣品溶液加入標液，然后進行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。樣品經選擇性吸附和洗脫后，進行富集分離。通常采用的方法是使液體樣品經過吸附劑，保留其中的被測物質，然后選擇適當強度的溶劑沖去雜質，然后用少量的溶劑對被測物質進行洗脫，從而實現快速分離、凈化和濃縮。還可以選擇性地吸附干擾雜質，讓被測物質外流；或者同時吸附雜質和被測物質，再用適當的溶劑選擇性地洗脫。

硅填料的粘接和封尾意味著什么？

硅膠填充物是不衍生的硅膠，通常作為所有硅膠結合相的基體。

在純硅膠 Si表面的親水硅醇基通過硅1烷化反應，形成疏水性烷1基或芳香基基團，從而改變填料的極性。例如，C18填料是將十八烷1基的長鏈與硅膠表面連接。

硅膠鍵合相中存在一定數量的未反應硅醇基，從而導致次生相互作用。3）淋洗--zui大程度除去干擾物（建議此過程結束后把小柱完全抽干）。這種次生相互作用對于提取或保留強極性物或污染物十分有用，但對分析物的吸附也可能是不可逆轉的。為減小未反應硅醇基的影響，通常是在鍵合反應之后，用封端劑鈍化填料，這個過程稱為封尾。

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動相極性的分離模式。

常見的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強度也逐漸增大。離子交換固相萃取適用于可解離成帶電離子的化合物，其機理是利用帶電荷的目標化合物離子與帶相反電荷的吸附劑之間的靜電吸引力。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標物洗脫，選擇的淋洗液應在不洗脫目標物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應能恰好完全洗脫目標物。

為何 SPE小柱操作強調流速？

SPE小柱填料充填壓實后，形成柱床，當溶劑流過小柱時，速度過快會產生兩個問題：一是對粘結相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過快會使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標物質的傳質過程，從而降低回收率。對于以上反相色譜柱，我們在使用及維護的時候可以按照同樣的操作方式：1、在條件允許情況下，在使用前zui好對新色譜柱按照說明書方法進行柱效測試。當柱流速度為0.5-3.0 mL/min時，通常不會產生溝槽效應，且溝槽的形成與柱床高度有關；當柱流速度為0-3.0 mL/min時，由于橫截面積較大，柱床較低，溝槽效應較小，因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集；當離子交換和特定吸附作用時，填料和分析靶物的作用時間較長，控制流速可保證良好的保留效果。

絕大多數的樣品都是用保留目標物的模式凈化的，下面舉個例子：

食品中乙1二胺四乙1酸二鈉的檢測，樣品經提取，絡合后，凈化；

SPE柱：月旭 Welchrom?SAX 150mg/6mL；

活化：5 mL 甲1醇、5 mL 水，棄去；

上樣：待凈化液全部上樣，控制流速，不宜過快，棄去；

淋洗：依次用5mL水，5mL甲1醇淋洗，抽干；

洗脫：5mL5%甲酸甲1醇水洗脫，抽干，收集洗脫液定容至5mL，過0.22μm濾膜，供液相色譜儀測定。

為什么 HLB小柱子不同于傳統(tǒng)的硅膠連接C18，廠商建議可不激1活平衡？

回答： SPE小柱活化平衡的目的有兩個，一是使功能團填料的粘附性和伸縮性保持對目標化合物的zui大吸附活性，另一個目的是去除填料本身可能引入的雜質。其中，spe柱是典型的固相萃取方式，其主要作用是吸附被稱為目標物吸附的化合物。硅膠鍵合C18，是一種在硅膠微球表面粘接的疏水性C18官能團，為使其對目標物保持充分吸附活性，需要在濕潤環(huán)境上樣物在填料表層形成的液膜(活化平衡)和上樣物的溶劑分子之間具有良好的相容性，目標物在膜間進行傳質，與粘合C18發(fā)生疏水作用而保留，C18本身不具有水浸潤性，直接上樣物，C18蜷縮，且由于高度的疏水性，使其難以與目標物中的目標物分子充分接觸，因此必須充分保留 HLB小柱內的目標物分子， HLB采用聚合物改性材料，添加親水基團，使其在上樣物溶劑中與目標物分子充分接觸。

固相萃取技術的復雜、難搞也是人所共知，下面列舉了一些固相萃取操作中的常見的問題及解決辦法，希望能對你的固相萃取操作有所幫助。

以下是固相萃取操作中常見的問題：

一、回收率低；

二、萃取重現性差；

三、凈化效果不理想；

四、SPE柱流速過低。

正相作用機理：

常見的極性固定相萃取材料包括：硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相固相萃取模式下，溶劑體系的極性應按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強度也逐漸增大。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標化合物洗脫，選擇的淋洗液應在不洗脫目標化合物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應能恰好完全洗脫目標化合物。結果表明：SPE正相萃取后，樣品基質多為弱極性，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標物多含有極性官能團。