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Tris中文品名為三羥;氨基;緩血酸胺;2-氨基-2-(羥)-1,3-丙二醇。是一種白Chemicalbook色結晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于、苯,不溶于、,對銅、鋁有腐蝕作用,有刺激性的化學物質。緩沖特性Tris為弱堿,在25℃下,它的pKa為8.1;根據緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。TrisChemicalbook堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應注意溫度對于Tris的pKa的影響。
Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會被去質子化,從而提高其溶解性,所以在核酸的溶解及核酸提取中一般也使用Tris緩沖液。需要注意的是,因其配置溶液時顯堿性,會吸收部分空氣中能生成碳酸的二氧化碳氣體,所以需要將盛裝Tris溶液的瓶蓋蓋嚴。另外Tris溶液對溫度敏感,每升高1度,pH值下降0.03,配置時需維持在室溫。
水合氫離子的濃度取決于弱酸與其共軛堿的濃度比。當加入少量強堿時,酸被中和,導致了氫氧根離子在溶液中很少累積,從而的濃度增加,的濃度減少。可以看到,雖然加入了強堿,但是溶液里的氫氧根離子變化很少,同時,濃度較大,相對的變化小,兩者比值幾乎無變化,因此根據公式,水合氫離子的濃度變化很小。加入弱酸則是同樣的道理。由于在大濃度基數上的微小變化不會改變比值,也因此維持了體系內氫離子和氫氧根離子濃度的平衡。
一旦確定了緩沖液的pH值,就需要選擇使用什么樣的緩沖體系。首先是在選擇緩沖體系時要確保選擇的緩沖體系在你設定的pH值上確實具有緩沖能力。選擇的緩沖體系,其解離常數pKa值應該在設定的pH上下一個pH值單位內。
再者是確保你使用的緩沖液濃度足夠高以達到實際緩沖溶液的作用,正常一般選擇的濃度是20~100mM。需要記住的是你所使用的緩沖體系不應該影響蛋白活性!例如,磷酸鹽會抑制激酶的活性,所以反應前應徹底地透析掉。